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人B細(xì)胞生長(zhǎng)因子(BCGF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)
BS-0279 人B細(xì)胞生長(zhǎng)因子(BCGF)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
本試劑盒用于定量檢測(cè)人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中B細(xì)胞生長(zhǎng)因子(BCGF)的濃度。
二、實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。微孔板預(yù)包被抗BCGF抗體，樣本中的BCGF與包被抗體結(jié)合后，加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。洗滌后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素，經(jīng)TMB底物顯色，顏色深淺與樣本中BCGF濃度成正比。
三、試劑盒組成
預(yù)包被酶標(biāo)板(96孔/48孔)
標(biāo)準(zhǔn)品(2700ng/L)
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
生物素標(biāo)記抗體
酶結(jié)合物(HRP標(biāo)記)
顯色底物A/B液
終止液
20×濃縮洗滌液
封板膜
說(shuō)明書(shū)
四、操作步驟
1. 試劑準(zhǔn)備
將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)30分鐘
濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍備用
2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋
取6個(gè)EP管，每管加150μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
首管加入150μL標(biāo)準(zhǔn)品原液混勻(1800ng/L)
依次倍比稀釋至2.5ng/L
3. 加樣
設(shè)空白孔(僅加稀釋液)、標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔
每孔加100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本(建議設(shè)復(fù)孔)
37℃孵育90分鐘
4. 洗滌
甩盡孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液350μL
靜置30秒后棄去，重復(fù)5次
拍干(勿用吸水紙直接接觸孔底)
5. 酶標(biāo)反應(yīng)
每孔加100μL生物素標(biāo)記抗體
37℃孵育60分鐘
同法洗滌5次
6. 顯色反應(yīng)
每孔加底物A/B液各50μL(避光操作)
37℃避光孵育15分鐘
每孔加終止液50μL終止反應(yīng)
7. 檢測(cè)
30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)450nm波長(zhǎng)OD值
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(OD值 vs 濃度)
五、注意事項(xiàng)
試劑使用前需平衡至室溫，避免反復(fù)凍融
不同批號(hào)試劑不可混用，有效期前使用
加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，推薦使用排槍
洗滌需干凈，拍干時(shí)避免交叉污染
顯色劑B液避光保存，終止液有腐蝕性
樣本OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍時(shí)需稀釋重測(cè)
六、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
樣本濃度=標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)應(yīng)濃度×稀釋倍數(shù)
七、性能指標(biāo)
靈敏度：<1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品濃度
線性范圍：2.5-1800ng/L(R2>0.99)
板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%
八、樣本要求
血清：室溫凝固后離心取上清
血漿：EDTA抗凝，避免溶血
保存：-20℃可存3個(gè)月，避免反復(fù)凍融
(注：具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn))
注：供科研使用，以上資料供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體請(qǐng)咨詢(xún)技術(shù)老師是或品牌商。
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